貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)

貼壁細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
將15mL離心管、T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶、PBS緩沖液、移液管、電動(dòng)移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30min消毒滅菌；
細(xì)胞完全培養(yǎng)基、0.25%胰酶-0.02%EDTA從4℃冰箱中取出后，復(fù)溫至室溫，備用。

貼壁細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 將準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基等物品用酒精消毒后放入安全柜中；
2. 從培養(yǎng)箱中取出待處理的細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)；
3. 用酒精消毒培養(yǎng)瓶，放入安全柜中；
4. 輕輕吸去細(xì)胞上清；
5. 加入2~3ml PBS緩沖液潤洗一次，吸去上清；
6. 加入1mL 0.25%胰酶-0.02%EDTA，輕輕晃勻、覆蓋所有細(xì)胞后，置于37℃培養(yǎng)箱靜置消化；
7. 消化1min左右，在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況；         
8. 消化完全后，加3ml完全培養(yǎng)基終止；
9. 按比例將細(xì)胞懸液分裝至培養(yǎng)瓶中；
10. 在顯微鏡下觀察傳代后的細(xì)胞密度及狀態(tài)；                 
11. 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：
1）培養(yǎng)過程中需維持細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長期，80%左右即可傳代，傳代比例請(qǐng)參照說明書建議；
2）消化時(shí)間不宜過長，大部分細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落即可中止消化，難消化的細(xì)胞可分次消化，每次時(shí)間不超過5min；
3）培養(yǎng)過程中需要定期換液，一般細(xì)胞建議2~3天換液一次。

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